/ml左右的细胞悬液进行梯度密度离心潮(2000转/分)20分钟,吸取75%与100%分离液面之间的白色云雾层,富含TIL细胞,用Hank氏液洗涤,离心,末次离心后,用0.2%台盼兰染色计数活细胞,最后用24孔板培养。
培养时，培养液应含10%人血清、青霉素、链霉素、两性霉素，Hepes缓冲剂及L-谷氨酰胺，培养液中还需加1000单位/ml的IL-2，培养2～3周。
②TIL细胞体外及体内杀伤瘤细胞的实验：
以胃癌细胞系SGC-7901为靶细胞，经过复苏及培养后，将其 调成1×105/ml 细胞数,加入96孔板中,每孔100μl,再加入 不同浓度的效应细胞,与靶细胞构成不同的比例,以MTT作为杀伤程度的指标,培养液中加过不同浓度的IL-2,在第14天,TIL细胞对胃癌细胞的杀伤作用达到最高水平,而不加IL-2者,不出现杀伤,TIL细胞对胃癌细胞的杀伤率一般为35%～50%。TIL细胞的优点和存在的问题：
TIL细胞的优点很多：①可直接从病人活何检标本，肿瘤引流的淋巴结以及 胸腹水中提出，从而避免了由病人外周血制备，因此更适合体质虚弱的病人；②TIL细胞可长期扩增，增殖力超过LAK细胞，容易达到治疗所需的细胞数量；③TIL细胞特异性及抗癌活性高，不损害其它正常细胞；④对IL-2依赖性低，免于使用大量IL-2带来的副作用；⑤大剂量使用时，一般可以耐受，很少毒副作用；⑥配合化疗，可增强TIL细胞的体内疗效，上术优点均为LAK细胞所不及。
TIL细胞只能应用同系动物或自体的淋巴细胞。制备步骤复杂，有待进一步改进，与其它淋巴因子的关系以及在体内杀伤瘤细胞的机制尚待进一步研究。
总之，TIL细胞目前不失为一种有效的治疗肿瘤的措施之一，临床疗效，特别在胃癌方面的疗效需要进一步扩大验证。
