诊断流腮和鉴定流腮病毒的血凝抑制试验应怎样做

时间:2006/9/1 23:56:34   文章来源:不详    作者:佚名  

文章导读:

        血凝抑制试验是一种操作简单、出结果快、费用低的实验室诊断方法。它既可用于鸡胚单膜腔分离的流腮毒株鉴定;还可用于患者早期和恢复期双份血清结果的判定。

  (1)取材:①血凝素、受染鸡胚的羊水或尿事囊液(适应殊)作血凝素。若血凝素滴度不高,可采用吐温—80及乙醚处理来提高血凝滴度。方法是于病毒液中加入最终浓度0.1计的吐温—80振动5分钟,再加1/2体积的乙醚,室温振动5小时,经离心沉淀将血凝素与乙醚分开。再向血凝素中吹气排尽乙醚,这样处理可提高血凝滴度2—4倍。②红细胞一般采用1%鸡红细胞,但豚鼠红细胞亦可。

  (2)鉴定病毒的血抑试验:采用1:160(4个血凝单位)的受染鸡胚的羊水或尿囊液,和4单位血凝抑制抗体等体积混合。37℃结合l小时,加1%鸡红细胞,置室温l一2小时判定结果,同时设血凝素量及红细胞对照管。为排除与副流感病毒抗原之间的交叉反应,用副流感病毒抗血清进行交叉血凝抑制试验。

  双份血清的试验方法,患者血清经56℃ 30分钟灭活,血清和血凝素混合后置37C结合1小时,加红细胞后放室温l一2小时后判定结果。

  (3)血凝滴度的判定:如病毒液稀释到1:320时出现“++++”凝集,1:640时“++”凝集,1:1280时不出现凝集,该病毒液的血凝滴度为640,它的一个血凝单位为1:640。进行血凝抑制测定时抗原用4个血凝单位即1:160。血抑效价以完全掏血凝出现的血清最高稀释度倒数。如1:80稀释的血清孔不出现凝集(血凝全被抑制),1:160的孔出现“++”凝集(50%血凝被抑制),1:320的孔出现“++++”(血凝全不被抑制),则该血清对测定病毒的血抑效价为160。一般来讲,血抑效价≥20才可以认为是特异性抑抑制,<20,>5者为可疑,<5为阴性。



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