A1 查菌
A1.1 标本制备
除常规部位如耳垂、眶上及颌下外,要在2~3块活动性皮损的边缘上取材,共5~6处;以75%酒精棉球擦拭皮肤后,用左手中指和食指将皮肤捏紧,使变苍白,右手持消毒手术刀,用刀尖切一长5mm,深2~3mm的切口,然后转持刀柄90°,来回刮取切口边缘和底部的组织液,再均匀地按顺序在清洁的载玻片上涂成直径5~7mm的薄膜。刮取时应注意防止带血;每切刮一部位后,均应将刀尖拭净并以酒精火焰消毒;每名病人应换一新刀片以避免交叉污染和感染;取完一名患者的标本后,应将载玻片的反面放在酒精火焰上来回晃动2~3次以固定之,然后标记病历号及取标本日期,放入玻片盒内,防潮、防尘、防日光,在三日内连同送检单送化验室做抗酸染色检查。
A1.2 抗酸染色
A1.2.1 在玻片涂膜上滴加石碳酸复红染液,置酒精灯火焰上加热至出蒸气,稍停,再热;反复三次,共历3~5min,清水缓缓冲洗;注意切勿使染液沸腾或干涸。
A1.2.2 加1%盐酸乙醇液脱色1/2~1min,至无红色脱落,再用流水缓缓冲洗;切勿直接冲涂膜处。
A1.2.3 用0.3%美蓝水溶液复染1~3min,然后流水自片端缓缓冲洗、晾干、镜检。
A1.3 细菌密度指数(BI)
油镜(10×100倍)下检查,麻风菌呈鲜红色,背景呈浅蓝色。阴性涂膜至少查200个视野。每个涂膜中的菌量以细菌指数表示:
1+ 平均每100个视野有细菌1~10条至少检查100个视野
2+ 平均每10个视野有细菌1~10条 至少检查100个视野
3+ 平均每1个视野有细菌1~10条 至少检查50个视野
4+ 平均每1个视野有细菌10~100条 至少检查50个视野
5+ 平均每1个视野有细菌100~1000条 至少检查50个视野
6+ 平均每1个视野有细菌1000条以上,有菌球。 至少检查25个视野
每名病人每次至少应选5个部位,各做1个涂膜。将5个涂膜所得的加号数的和除以5,即为该病人的细菌指数。
A2 病理标本
检查麻风皮损的病理,对诊断分型、评价疗效和判愈都很重要。标本要用10%中性福尔马林固定,送当地的中心实验室(州、省级)做HE和抗酸法染色;实验室并应在一月内出报告。
活检应选活动性损害的边缘高起部位,要在局部麻醉下无菌操作,避免挤压,沿皮纹切12mm×6mm,深达皮下脂肪组织的皮瓣,固定后附上送检单送至州、省级皮肤病防治所病理室。
中性福尔马林固定,可较好地保存组织的原有形态和麻风菌的抗酸性,配制方法:
福尔马林(40%甲醛水溶液) 100mL
磷酸二氢钠(NaH2PO4·2H2O) 3.5g
磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O) 6.5g
蒸馏水 900mL