>赤芍＋甘草＋地龙组、空白组 。每组10只，按5mL/kg，每日1次于晨 8时灌胃，分别于第6、7、8、9、10天每组各取2只，腹腔按10mL/kg注射上述天花粉氢氧化 铝凝胶，20min后，右腹腔内注射上述Hanks液（注射前加热）15～20mL，轻揉腹部2min后 ，脱颈椎处死大鼠，打开腹腔，用毛细吸管收集腹腔液（富含肥大细胞）于离心管中， 2000r/min离心15min，弃上清液用含大白鼠血清的Hanks液洗涤1次，离心弃上清液，加入含 25％大白鼠血清的Hanks液洗涤1次，离心弃上清液，加入含25％大白鼠血清的Hanks液1 mL混匀，制成肥大细胞悬液观察。取制备的肥大细胞悬液1滴于载玻片上，盖上涂有中 性红染液的盖片，在高倍显微镜下观察，正常肥大细胞为正圆形，边缘整齐；脱颗粒的 肥大细胞边缘不整齐或细胞破裂，有颗粒自细胞浆溢出，随机计数100个细胞，计数脱颗 粒细胞数及脱颗粒百分数。电镜观察，取大白鼠的小肠系膜，用2.5％戊二醛预固定2h， 磷酸盐缓冲液漂洗3次，1％四氧化二锇固定1h，丙酮梯度脱水。Epon－618环氧树脂包埋 ，超薄切片机切片，JEOL－10ESX透射电镜观察，加速电压80kV，放大倍数8000倍。
2.被动皮肤过敏反应试验：抗血清的制备：取4只未用药（200±30）g大白鼠，将上述天 花粉氢氧化铝凝胶混悬液脚掌注射，每个脚掌注射0.1mL，每只大白鼠0.4mL，15d后，断 头取血离心得抗血清。将上述取得的抗血清稀释10倍。另取上述用药各组大白鼠8只，剪 去背部的毛，选2点，每点皮内注射上述抗血清0.1mL，48h后进行抗原攻击，尾静脉注射 天花粉10mg/kg，天花粉用1％伊文思蓝溶液配成1mg/kg。20min后断头处死动物，翻转背部 皮肤，将蓝色反应斑皮片剪下，剪碎加入丙酮－生理盐水（7∶3）混合溶液6mL浸泡， 次日过滤并离心，在波长610nm处测吸光度A值。
3.实验室检测：急性荨麻疹患者口服抗敏口服液10mL，日3次，共治疗7d。于治疗前后各 取患者血清，采用双抗体夹心ELISA法检测IL－2及IL－4，ELISA药盒购自深圳晶美生物有 限公司。首先分别将标准品IL－2稀释为1000、500、250、125、62.5、0pg/mL，IL－4稀释为 375、187.5、93.75、46.88、23.44、0pg/mL，分别将稀释后的标准品及标本加入已用抗体IL－ 2，IL－4单抗预包被的聚苯乙烯反应小孔内，每孔100μL，用封板胶纸封住反应孔，37 ℃，90min，用PBS洗5次，每孔加生物素标记二抗100μL，封住板孔，37℃，60min。PBS洗 板5次，再加稀释好的酶联物100μL，封住板孔，37℃，30min。PBS洗板5次，每孔加底物 A、B各50μL，或1滴，避光37℃，15min。每孔加终止液50μL或1滴混匀，即刻用Bio－ Rad公司生产的酶标仪在波长450nm处测其吸光度A值，用直线回归分析，求出其标准方程 ，计算待检血清中IL－2、IL－4的含量，单位为pg/mL。
结果
一、肥大细胞脱颗粒实验
1.各组肥大细胞脱颗粒百分数：从表1可见，抗敏组的肥大细胞脱颗粒百分数与其它各组 相比最小，空白组与其它各组相比最大，其它各组也较高，各组与抗敏组比较，差异均 有显著性（P＜0.01），说明抗敏口服液可以有效抑制肥大细胞脱颗粒。
2.被动皮肤过敏实验：抗敏组的A值最小为0.08±0.04，显著低于赤芍组(0.32±0.09)、地龙 组(0.21±0.14)、甘草组(0.25±0.16)、赤芍＋甘草组(0.24±0.02)、赤芍＋甘草＋地龙组(0.28± 0.08)及空白组(0.48±0.06),经t检验，P均＜0.01。
二、临床试验
检测结果见表2。治疗前，荨麻疹患者与健康人比较IL－2明显降低，IL－4明显升高，P均 ＜0.01。经抗敏口服液治疗后荨麻疹患者IL－2、IL－4趋于正常，与正常人比较，P＞0.05。 治疗前后比较，差异均有显著性(P＜0.05)。
表1 药物对肥大细胞脱颗粒数的影响
组别 喂药天数 q值 P值
6d 7d 8d 9d 10d
抗每组 22 19 14 11 11 - -
赤芍组 80 88 71 70 72 3.67 ＜0.01
地龙组 86 83 80 79 72 4.55 ＜0.01
甘草组 76 74 71 76 71 3.93 ＜0.01
赤芍+甘草组 72 70 70 70 67 3.11 ＜0.01
赤芍+甘草+地龙组 51 54 59 50 36 1.04 ＜0.01
